货号：B012/B013/B017

规格：20T(200微孔)/50T(500微孔)/500T(5000微孔)

产品简介及说明：

碱性条件下，蛋白将Cu²⁺还原为Cu⁺，Cu⁺与BCA试剂形成紫蓝色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mmol/L，无EGTA，二硫苏糖醇(DTT)低于1mmol/L，β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可使用本公司《Bradford蛋白定量试剂盒》(货号B035)。

试剂盒清单：

保存条件：4°C/-20°C保存，有效期12个月。

使用说明：

1. 微孔酶标仪法

a. 配制工作液：根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24h内稳定。

b. 稀释标准品：取10μL BSA标准品用PBS稀释至100μL(样品一般可用PBS稀释)，使终浓度为0.5mg/mL。将稀释后标准品按0、2、4、6、8、12、16、20μL加到96孔板的蛋白标准品孔中，加PBS补足至20μL。

c. 将样品作适当稀释(最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释)，加20μL到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量样品时误差偏大，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。

d. 各孔加入200μL BCA工作液，37°C放置15-30min。用酶标仪测定A562nm，根据标准曲线计算出蛋白浓度(建议每批次蛋白浓度测定时均做绘制标准曲线)。使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

2. 分光光度计法

a. 配制工作液：根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24h内稳定。

b. 稀释标准品：取100μL BSA标准品用PBS稀释至1mL(样品一般可用PBS稀释)，使终浓度为0.5mg/mL。

c. 取八支(或者更多)5mL离心管，标上号，按下表加入试剂(可选：建议每批次蛋白浓度测定时均做绘制标准曲线)。

d. 37°C放置15~30min。用分光光度计测562nm处吸光值，根据标准曲线计算出蛋白浓度。

1. 试剂在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或37°C温育使其溶解，如发现细菌污染则应丢弃。

2. 长期不用时，BCA试剂A与BCA试剂B可置于4°C保存，如发现细菌污染则应丢弃。

3. 样品中若含有较多干扰物质时，建议使用本公司《Bradford蛋白定量试剂盒》(货号B035)进行蛋白浓度测定。4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Version 2023060801