货号:B001
规格:100mL
产品简介及说明:
1. RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(Immunoprecipitation)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。
2. 本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品,也可以用于真菌或细菌样品。
3. RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。
4. 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用本公司《BCA蛋白浓度测定试剂盒》(货号B012)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
试剂盒清单:
产品名称 | 包装 | 储存条件 |
RIPA裂解液(强) | 100mL | -20°C |
保存条件:-20°C保存,有效期12个月.
使用说明:
1. 对于培养细胞样品:
a. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前加入合适的蛋白酶抑制剂,或根据实验需要加入适当的蛋白酶、磷酸酶抑制剂混合物。
b. 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞1-2s后,细胞就会被裂解。植物细胞宜在冰上裂解2-10min。
c. 对于悬浮细胞:离心收集细胞,轻轻涡旋或者弹击管底以把细胞尽量分散开。按照6孔板每孔细胞加入150-250μL裂解液的比例加入裂解液。轻弹管底以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
d. 如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。对于细菌或酵母:对于1mL菌液或酵母液,离心去上清,如果有必要可以使用PBS洗涤一次,充分去除液体后,轻轻涡旋或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加
入100-200μL裂解液,轻轻涡旋或者弹击管底以混匀,冰上裂解2-10min。希望获得更好的裂解效果,细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化,然后再使用本裂解液进行裂解。
e. 裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞或者1mL的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入150μL裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μL或250μL。每100万动物细胞用100μL本产品裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为2-4mg/mL,不同细胞有所不同。
f. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫共沉淀等操作。
2. 对于组织样品:
a. 把组织剪切成细小的碎片。
b. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数min内加入合适的蛋白酶抑制剂,或根据实验需要加入适当的蛋白酶、磷酸酶抑制剂混合物。
c. 按照每20mg组织加入150-250μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
d. 用玻璃匀浆器匀浆或使用手持式组织研磨仪研磨,直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨,研磨充分后加入裂解液进行裂解。
e. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。每20mg冻存的小鼠肝脏组织用200μL本裂解液裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为15-25mg/mL,不同状态的不同组织有所不同。
f. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈涡旋使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器或研磨设备,缺点是不如匀浆或研磨那样裂解得比较充分。
注:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
注意事项:
1. 为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2. 需自备PMSF。如果无需检测磷酸化蛋白,也可以选不含磷酸酶抑制剂的蛋白酶抑制剂化合物。
3. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4°C进行。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Version 2023060601
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