货号：B002

规格：100mL

产品简介及说明：

1. RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(Immunoprecipitation)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。

2. 本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品，也可以用于真菌或细菌样品。

3. RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

4. 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用本公司《BCA蛋白浓度测定试剂盒》(货号B012)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

试剂盒清单：

保存条件：-20°C保存，有效期12个月。

使用说明：

1. 对于培养细胞样品：

a. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前加入合适的蛋白酶抑制剂，或根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

b. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞1-2s后，细胞就会被裂解。植物细胞宜在冰上裂解2-10min。

c. 对于悬浮细胞：离心收集细胞，轻轻涡旋或者弹击管底以把细胞尽量分散开。按照6孔板每孔细胞加入150-250μL裂解液的比例加入裂解液。轻弹管底以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

d. 对于细菌或酵母：对于1mL菌液或酵母液，离心去上清，如果有必要可以使用PBS洗涤一次，充分去除液体后，轻轻涡旋或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入100-200μL裂解液，轻轻涡旋或者弹击管底以混匀，冰上裂解2-10min。如果希望获得更好的裂解效果，细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化，然后再使用本裂解液进行裂解。

e. 裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞或者1mL的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入150μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μL或250μL。每100万动物细胞用100μL本产品裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为2-4mg/mL，不同细胞有所不同。

f. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫共沉淀等操作。

2. 对于组织样品：

a. 把组织剪切成细小的碎片。

b. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数min内加入合适的蛋白酶抑制剂，或根据实验需要加入适当的上述蛋白酶、磷酸酶抑制剂混合物。

c. 按照每20毫克组织加入150-250μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

d. 用玻璃匀浆器匀浆或使用手持式组织研磨仪研磨，直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液进行裂解。

e. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。每20mg冻存的小鼠肝脏组织用200μL本裂解液裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为15-25mg/mL，不同状态的不同组织有所不同。

f. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋使样品裂解充分。

注：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

注意事项：

1. 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2. 需自备PMSF。如果无需检测磷酸化蛋白，也可以选不含磷酸酶抑制剂的蛋白酶抑制剂化合物。

3. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4°C进行。

4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Version 2022100801