货号：C011/C012/C013/C014/C015

规格：100次/500次/1000次/3000次/10000次

产品简介及说明：

CCK-8试剂检测细胞活力，可用于细胞增殖和毒性分析，方法简便而准确。其基本原理为：该试剂中的WST-8与MTT类似，在电子载体作用下，被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲臜染料(Formazan)，甲臜的生成量与活细胞的数量和活力成正比，因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

试剂盒清单：

保存条件：-20°C避光保存，有效期12个月。

使用说明：

1. 使用96孔板，细胞培养和处理完毕。

2. 迅速加入CCK-8试剂，每孔10μL。

3. 培养板放回培养箱，37°C孵育1~4h。

4. 于450nm处测定OD值。

5. 结果分析：将各测试孔的OD值减去对照孔或调零孔OD值。各平行孔的OD值取平均数。细胞活力%=(加药细胞OD-空白OD)/(对照细胞OD-空白OD)×100%

6. 若使用96孔外的培养板，试剂用量等比例增减。

注意事项：

1. 初次使用时，建议先做几个孔摸索条件，考察接种细胞的数量，和加入CCK-8试剂后的培养时间。

2. 加入试剂速度要快，以避免试剂残留和加样速度不一所致反应时间不同造

成的显色误差。有条件的情况下，建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。为避免枪头上的残留所带来的加样误差，CCK-8试剂可在加样前用培养基稀释混匀。

3. 试剂加入后轻轻振摇培养板，使CCK-8试剂与培养基充分混匀。

4. 试剂加入后培养时间根据细胞种类的不同和每孔细胞数量的多少而异。对于贴壁细胞，加入CCK-8的培养时间一般为1~4h，但在培养30min左右即可取出肉眼观察显色程度(根据细胞种类而定)。与贴壁细胞相比，悬浮细胞较难显色。对于悬浮细胞，在加入CCK-8培养1~4h后，可先从培养箱中取出，目测染色程度或用酶标仪测定决定。白细胞较难显色，因此需要较长的CCK-8反应时间或增加细胞数量(~10⁵个细胞/孔)。若显色困难，可以将培养板放回培养箱，继续培养数h后再确定。注意：CCK-8的最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准。

5. CCK-8试剂中的WST-8会与还原剂反应生成WST-8甲臜，如果实验中有还原剂，需要检查背景的OD值，即在不含细胞的培养基中加入药物，然后加入CCK-8试剂在一定时间内检测，和不加药物的培养基进行比较(只加CCK-8试剂)，如果OD值明显偏高，则说明有反应。

6. 若细胞培养时间较长导致培养基颜色或pH发生变化，建议更换新鲜培养基后再加入CCK-8试剂。含有酚红的培养基不影响本试剂的使用。

7. 如果样品为高浑浊度的细胞悬液，建议设定600nm(或600nm以上)作为参比波长，扣除参比波长的OD值即可。

8. 如果要测定细胞的具体数量，需要先做一个标准曲线。

9. 若测得OD值过高，可酌减铺板细胞数或CCK-8试剂用量。

10. 每孔加入10μL CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200μL，则需加入20μL CCK-8溶液，其它情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液，和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。

Version 2022120101