货号：C031/C032

规格：5mL/20mL

产品简介及说明：

1. 外泌体是含有RNA、DNA和蛋白质的小细胞外囊泡(50-200nm)，它们是由各种类型的细胞在培养过程中分泌的，并在血液、唾液、尿液和母乳等体液中大量存在。外泌体被认为是特定细胞间效应物及信号大分子传递的信使，然而，它们的形成、组成成分以及所参与的生物学过程仍不完全清楚。

2. 对外泌体功能和转运机制的生物学研究需要提取完整的外泌体，但目前使用的提取方法复杂繁琐，且特异性不高。磁珠法细胞外泌体提取试剂盒(CD63亲和法)提供了一种简单可靠的方法从细胞培养基样品中提取完整的外泌体。试剂盒中的筛选磁珠与提取试剂结合后，捕获样品的外泌体，然后通过磁性分离即可获得。

试剂盒清单：

注：需自备PBS缓冲液、0.22μm低吸附针头过滤器、磁力架。

保存条件：分类保存，有效期6个月。

该方案以1mL筛选磁珠进行分离为例，如需更大体积，请按比例放大试剂用量。使用说明：

1. 提取试剂的配制：

称取0.5mg试剂A于1.5mL EP管，加入1mL试剂B，轻轻吹匀溶解，制成提取试剂，于-20°C保存。

2. 捕获磁珠的制备：

a. 将筛选磁珠振荡混匀10min或涡旋30s重悬。

b. 取一新的2mL或5mL EP管，加入1mL重悬后的筛选磁珠，置于磁力架上，待磁珠完全被捕获后，吸弃上清。

c. 加入1mL PBS缓冲液，将EP管从磁力架上取下，上下颠倒3-5次，充分混匀，重新放回磁力架上，待磁珠完全被捕获后，吸弃上清。重复该步骤两次。

d. 加入1mL配制好的提取试剂，充分混匀，置于摇床上，4°C孵育1h。

e. 将EP管置于磁力架上，待磁珠完全被捕获后，吸弃上清。

f. 加入1mL PBS缓冲液，将EP管从磁力架上取下，上下颠倒3-5次，充分混匀，重新放回磁力架上，待磁珠完全被捕获后，吸弃上清。重复该步骤两次。

备注：制备好的捕获磁珠可于PSB溶液中在4°C保存一周。使用前重新放回磁力架上，待磁珠完全被捕获后，吸弃上清。

3. 外泌体提取：

a. 于含有捕获磁珠的EP管中加入2mL待提外泌体的样品(如培养基)，置于摇床上，4°C孵育4h。

b. 将EP管置于磁力架上，待磁珠完全被捕获后，吸弃上清。

c. 加入1mL PBS缓冲液，将EP管从磁力架上取下，上下颠倒3-5次，充分混匀，重新放回磁力架上，待磁珠完全被捕获后，吸弃上清。重复该步骤两次。

d. 加入750μL洗脱液，使用移液器轻轻吹打混匀。将EP管置于磁力架上，待磁珠完全被捕获后，吸取上清液至新的EP管中，即为外泌体悬液。

备注：为获得高浓度的外泌体，可减小洗脱液体积并分三次洗脱(如：加入100μL洗脱液，使用移液器轻轻吹打混匀，将EP管置于磁力架上，待磁珠完全被捕获后，吸取上清液至新的EP管中，重复该步骤三次，共计300μL。)

e. 所得外泌体悬液使用0.2μm或0.22μm低吸附针头过滤器(自备)过滤，滤液即可用于下游实验。

备注：如需继续下游体内实验或细胞实验，建议于无菌环境或无菌超净台/生物安全柜内用无菌滤头过滤。所提取的外泌体在2-8°C可保存1周，在-20°C可长期保存。

注意事项：

1. 为节约试剂，可将样本按如下步骤进行浓缩，该步骤可能导致1/3-1/4外泌体的损失，请准备充足的样品量。

a. 收集细胞上清。

b. 4°C，5000rpm离心30min，吸取上清，去除细胞沉淀。

c. 4°C，10000rpm离心30min，吸取上清，去除细胞碎片和较大细胞囊泡。

d. 转移上清至100kDa超滤管(自备)中，4°C，3800rpm离心，待溶液浓缩至原体积的1/10时，收集浓缩液至新的EP管，用于后续外泌体提取实验。

2. 为了确保所分离的外泌体来源于您感兴趣的细胞，建议使用无外泌体胎牛血清(FBS)培养细胞，否则会导致所收集的细胞来源外泌体掺入胎牛血清外泌体，出现污染现象。若无法获得无外泌体胎牛血清，一些细胞系也可采用无血清培养的方式培养12h，即可避免外泌体污染现象。

3. 本产品仅供研究使用。不适用于人类或动物的治疗或诊断用途。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5. 因有些样品外泌体含量较少，蛋白浓度较低，可能会低于常规BCA蛋白定量试剂盒检测限。建议使用本公司《BCA微量蛋白浓度测定试剂盒》(货号B011)进行蛋白浓度测定。

Version 2023082902