货号：C039/C040

规格：0.75mL/1.5mL

产品简介及说明：

1. 本产品是一款新开发的真核细胞DNA转染试剂。它具有多重优势：①在多种细胞中具有超高转染效率；②DNA-Lipofectamine复合体可直接加入细胞培养液中，有无血清均可；③多数细胞转染后不必换液，少数敏感细胞可在转染后4-6h换液去除DNA-Lipofectamine复合体；④不建议用本产品转染RNA。

2. 本产品在易转染细胞(如：HEK293、MCF7)和不易转染细胞(如：小鼠滋养层干细胞(TS)和C2C12细胞)中进行过大量的测试，无微生物污染。

试剂盒清单：

保存条件：4°C保存，有效期24个月。

使用说明：

以24孔板为例。

贴壁细胞：转染前一天接种适量细胞以达到第二天转染时50-90%的细胞密度，如0.3-2.0×10⁵。

悬浮细胞：转染当天每孔接种4-8×10⁵细胞。

1. 按如下方法混合制备DNA-Lipofectamine复合体。

a. 将适量DNA加入25μL无血清培养基中，混合均匀。

b. 轻轻混匀Lipofectamine，吸取适量体积加入25μL无血清培养基中，混合均匀并置于室温5min。

注：稀释后的DNA与Lipofectamine应在30min内混合，超过30min可能会降低效果。如果用DMEM来稀释Lipofectamine，则应在10min内与DNA混合。

c. 混合稀释好的DNA与Lipofectamine，共50μL，混合均匀并室温放置20min以形成复合体。

注：该复合体在室温中可保持稳定至少5h。

2. 将50μL DNA-Lipofectamine复合体加到细胞培养皿中，轻轻摇晃培养皿混匀。

3. 在37°C CO₂培养箱中培养24-48h之后进行转染效率检测。转染后4-6h换液不会降低转染效果，可以不必换液。

稳定细胞系筛选：转染24h后，以1:10或者更高的比例传代细胞，贴壁后加入筛选抗生素。

 注意事项：

1. DNA(μg)与Lipofectamine(μL)的比例适用于1:2至1:3。以24孔板的1个孔为例，转染0.3-2.0×10⁵细胞可用0.5-1μg DNA与1-3μL Lipofectamine混合。针对具体实验，调节DNA/Lipofectamine比例可以优化转染效率。

2. Lipofectamine细胞毒性低，多数细胞转染时的细胞密度可适用较宽范围，如50-90%，60-80%的细胞密度通常可以获得较好的转染效果，具体细胞以优化后条件为准。

3. 转染时，不必使用无抗生素培养基。

4. 可以用Opti-MEM或其它无血清培养基，如DMEM，来稀释DNA与Lipofectamine。

5. 放大或缩小转染体系：转染除24孔板之外的其它细胞培养皿中的细胞，可根据培养面积按比例调整DNA、Lipofectamine、细胞量和培养基体积(参见下表)。对于自动化，大规模96孔板体系，建议混合大体积的转染复合体。注：可通过将悬浮细胞直接加入96孔板中混合的转染复合体实现快速操作。悬浮细胞密度应为常规细胞接种的2倍。

6. 可通过调整DNA、Lipofectamine浓度、细胞密度以获得最高转染效率和降低对细胞的非特异性影响。可在50-90%之间调整细胞密度。DNA(μg)与Lipofectamine(μL)比例可在1:0.5到1:5范围内调整。

7. 本产品仅供研究使用。不适用于人类或动物的治疗或诊断用途。

8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。