货号：B036/B037

规格：50次/100次

产品简介及说明：

细胞线粒体分离试剂盒用于从人和动物细胞中分离出完整且高纯度的线粒体。适合于培养细胞的线粒体的制备。其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。

试剂盒清单：

保存条件：4°C保存，有效期12个月。

使用说明：

该方案以从1-5×10⁸细胞中分离线粒体为例，根据样品数量同比例调整试剂用量。

1. 收集细胞：

对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用胰酶细胞消化液消化细胞，100-200g，4°C离心5-10min收集细胞。

对于悬浮细胞：直接于100-200g，4°C离心5-10min收集细胞。

2. 洗涤细胞：

加入适量预冷的PBS重悬细胞沉淀，600g，4°C离心5min，弃上清。

3. 加入1.1mL试剂A使细胞沉淀重悬，转移细胞悬液至适当大小的玻璃匀浆器中，冰上孵育10min。

4. 使用玻璃匀浆器匀浆30下左右，取约2μL细胞匀浆置于显微镜下观察，当60%以上细胞已破碎时即可停止匀浆进入下一步。

5. 将细胞匀浆转移至离心管中并迅速加入0.8mL试剂B，上下颠倒混匀。

6. 加入1mL试剂C，1300g，4°C离心5min。

7. 收集上清于新的离心管中(勿吸到沉淀)，1300g，4°C离心5min。

8. 重复步骤7一次。

9. 收集上清于新的离心管中(勿吸到沉淀)，7000g-17000g，4°C离心5min。

10. 弃上清，于沉淀中加入适量试剂C(试剂C用量根据所需浓度而定)，7000g-

17000g，4°C离心15min。

11. 弃上清(弃上清过程尽量保证离心管壁无液体残留)，用合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，即为所得线粒体溶液，立即使用或-70°C保存。

 注意事项：

1. 为保证获得完整的线粒体，务必做到：第一，全程低温操作；第二，快速；第三，在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞，这是制备线粒体的最关键环节。

2. 以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。

转速与离心力换算：

G=1.11×10^-5×R×[rpm]²

G为离心力，一般以g(重力加速度)的倍数来表示；

[rpm]²即：转速的平方；R为半径，单位为厘米。

3. 进行Western Blot和2D-胶电泳，可直接加入上样缓冲液裂解线粒体。

4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。